DETERMINACIÓN DEL Rh EN MANCHA HEMÁTICA SECA

OBJETIVO:

Determinar el Rh de una muestra hemática seca por medio de la técnica de la aglutinina adquirida (aglutininas en frío)

MATERIAL: REACTIVOS:

Telas de algodón lavado sin apresto Suero anti-humano anti-Rh

Tubos de ensaye Solución salina isotónica al 0.85%

Aplicadores de madera Albúmina bovina al 22%

Parafilm Eritrocitos “O” Rh positivos al 2%

Baño María

Termómetro

Centrífuga

METODOLOGÍA:

1.- En tubos de ensaye de cristal se coloca en el fondo un corte de tela de 3 mm, impregnada de muestra hemática, marcando los tubos como se indica:

a) Testigo Rh positivo (dos tubos)

b) Testigo Rh negativo (dos tubos)

c) Problema (dos tubos)

Cuando no se tiene la experiencia necesaria, se recomienda correr el método por duplicado para la muestra, cuando su pericia sea adecuada, mantenga el doble en los testigos.

2.- Colocadas las muestras en sus respectivos tubos, agregue una gota de suero anti-Rh anti-humano a cada tubo e impregne la tela con ayuda de un aplicador (realizando movimientos de golpeteo suaves pero firmes)

3.- Agregue dos gotas de S.S.I. e impregne con ayuda de un aplicador como en el caso anterior (aquí se aumenta la superficie de contacto de las proteínas)

4.- Se tapa la boca de los tubos con parafilm (en caso de no tener, úsese algodón)

5.- Incube a 37°C por 15 minutos exactamente.

6.- Pasado el tiempo, destape los tubos y extraiga las telas contenidas en los tubos con la ayuda de un aplicador (debe ser limpio para cada muestra)

7.- Se agregan a cada tubo dos gotas de albúmina bovina al 22% (favorece la aglutinación aumentando la superficie del eritrocito)

8.- Agite suave y firmemente.

9.- Incube a 37°C por 4 minutos.

10.- Saque del baño María y agregue a cada tubo una gota de eritrocitos Rh positivo al 2%.

11.- Agite e incube a 37°C por 15 minutos.

12.- Saque del baño María y centrifugue a 3500 r.p.m. por 3 minutos.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

La clara aglutinación indica Rh NEGATIVO, la no-aglutinación indica Rh POSITIVO.

Esta técnica se usa también para determinar grupo sanguíneo en semen y en saliva.